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系统性红斑狼疮
血管炎
相关自身抗原的血清学筛选
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目的:血管炎是系统性红斑狼疮(SLE)主要的发病机制之一。但目前对于与SLE血管炎相关的自身抗体尚不清楚,不能对其进行早期诊断、及时治疗和判断预后。本研究拟利用SEREX技术筛选与SLE血管炎相关的自身抗原,进一步证实SEREX筛选自身免疫性疾病相关自身抗原(自身抗体)的可行性;通过对筛选出自身抗原的功能分析,找出有助于SLE诊断、治疗和判断预后的自身抗体。 方法:收集四川大学华西医院2004年10月至2005年1月SLE住院病人血清作为筛选血清。病例入选标准:(1)符合美国风湿病学会(ACR)1982年制定的SLE诊断标准,且免疫学检查ANA滴度≥1:320;(2)不伴有感染或者其它自身免疫性疾病。将8例SLE患者的混合血清作为筛选血清。利用人微血管内皮细胞cDNA文库(}tMVEC),采用SEREX技术进行血清学筛选。筛选出的阳性克隆经内部剪切、酶切鉴定及核苷酸序列测定,最后采用NCB工的网上序列分析软件BLAST进行生物信息学分析。有意义的阳性克隆再分别利用正常人血清和单个SLE病人血清重复筛选一次,以排除假阳性克隆。 结果:1.第一轮共筛选出18个阳性反应克隆。经过第二轮筛选,获得11个克隆为非自身IgG克隆。2.11个阳性克隆经内部剪切、酶切鉴定及核苷酸序列测定,最后通过BLAST软件进行生物信息学分析发现,11个阳性克隆cDNA序列与3个已知的人类基因序列具有较高的同源性,核苷酸序列相似性分别为95%~99%。3.5个阳性克隆cDNA序列与人类基因序列SSA同源,4个阳性克隆eDNA序列与人类基因序列SSB同源,2个阳性克隆cDNA序列与人类基因序列YB—l同源。其中YB—l尚未被报道过与SLE血管炎相关。该基因在SLE中的具体功能有待进一步研究。4.利用正常人血清和单个SLE病人血清对YB-1克隆重复筛选一次,排除了YB-l为假阳性克隆的可能性。 结论:本研究进一步证实SEREX技术在自身免疫性疾病SLE中的适用性,拓宽了SEREX技术的应用范围。筛选出与SLE血管炎相关的新的自身抗体YB-l。SEREX技术提供了一种新的策略筛选与SLE相关的自身抗体a利用SEREX技术,我们可能筛选出敏感性或者特异性高的自身抗体、可能作为治疗靶点的自身抗体、能够判断疾病预后的自身抗体,从而有助于SLE的诊断、治疗和判断预后。
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